miR-3188有什么功能?
研究者创造miR-3188能够抑制HONE1-EBV和SUNE1细胞的成长、G1到S细胞周期的转化过程,体内实验结果也显示miR-3188能抑制肿瘤发生。
转染miR-3188 mimics、inhibitor到细胞，EdU试验不雅观察。赤色细胞为增殖的细胞。
这个功能背后的机制是...
miR-3188的过表达能下调c-JUN和CCND1，p-PI3K和p-AKT的表达水平，同时增强p21和p27；有趣的是敲除miR-3188后，5-8F细胞涌现了相反的效果，且加入miR-3188 mimic后能规复此征象，表明miR-3188通过抑制PI3K/AKT及下贱的c-JUN和G1/S过渡旗子暗记来抑制细胞成长。
找miRNA靶基因很主要
TargetScan和RNA杂交演算推测mTOR是miR-3188的靶标，并通过了研究者的体外实验、对移植瘤的免疫组化实验、荧光素酶报告基因实验得到验证。
mTOR是靶基因?证明看看
转染mTOR到miR-3188过表达的NPC细胞，进行MTT、EdU检测，创造mTOR能增强细胞增殖；过表达mTOR还能挽救miR-3188引起的5-FU增敏浸染，结合siRNA实验（下图），可得出mTOR是miR-3188的直接靶点，是造成细胞成长抑制与勾引NPC对5-FU敏感的关键。
转染si-mTOR到3种细胞后，Western blot检测内源PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、 CCND1和c-JUN的蛋白表达情形，结果与miR-3188过表达效果同等
转录调控机制研究, GO!
干系基因这么多，从何下手？研究者利用UCSC、PROMO和TFSEARCH生物信息剖析软件，剖析miR-3188的转录起始位点上游3-kb区域，创造包含了3个c-JUN结合位点。于是研究者敲降c-JUN，进行qPCR实验，创造miR-3188表达显著增加，解释c-JUN是miR-3188的上游调节基因；综合EMSA、ChIP实验证明3个结合位点都是有效的。
研究结束了?别忘了通路
FOXO1被宣布勾引PI3K/AKT旗子暗记通路，于是研究者探究他对NPC细胞的影响，创造它能调控NPC细胞增殖和细胞周期。通过miRNA芯片，剖析得包括含miR-3188在内的82条miRNA由于FOXO1过表达而显著下调。随后通过实验，研究者得出FOXO1通过PI3K/AKT/c-JUN旗子暗记通路勾引miR-3188表达。
miR-3188表达与FOXO1的表达呈正干系，而与mTOR、c-JUN的表达呈负干系；miR-3188对NPC的浸染紧张是通过负反馈环实现：miR-3188是FOXO1旗子暗记的下贱效应器并在NPC细胞中参与FOXO1勾引的成长抑制；miR-3188直接靶向mTOR从而跟FOXO1一样阻碍PI3K/AKT调节活动，尤其是下贱细胞因子c-JUN和p-mTOR，进而影响细胞周期，抑制细胞成长；但同时PI3K/AKT会通过c-JUN与miR-3188启动子区的结合来负反馈调节miR-3188的表达。
原文：Zhao M,et al. miR-3188 regulates nasopharyngeal carcinoma proliferation and chemosensitivity through a FOXO1-modulated positive feedback loop with mTOR-p-PI3K/AKT-c-JUN.Nat Commun. 2016 Apr 20;7:11309.
作者：锐博生物
